Cromatografía Líquida, trabajo de laboratorio: nitroxinil

Cromatografía líquida

Ferreyro Ignacio

Fusé Victoria

Orte Marcos

Verón Mariano

Villemur Juan

Cátedra: Detección de contaminantes en agua y efluentes líquidos – Cursada 2006

Licenciatura en Tecnología Ambiental, Departamento de Física y Medio ambiente,

Facultad de Ciencias Exactas, UNICEN

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Objetivo:

Desarrollo de un método cromatográfico para conocer la concentración de una muestra problema de un analito conocido, nitroxinil (desparasitarlo).

I. Introducción teórica

Cromatografía líquida

La cromatografía líquida (HPLC) es una técnica que se emplea para separar y determinar un material especifico en una muestra líquida.

Se inyecta un volumen determinado de muestra en la cabeza de una columna de separación que está llena de un lecho de material absorbente. Se introduce un líquido en la columna para que los componentes se discriminen en bandas separadas en el lecho. Un detector en la salida de la columna de separación analiza estas bandas (analitos) a medida que salen de la columna. Pueden seleccionarse diferentes tipos de columnas de separación basadas en distintos mecanismos de retención de los analitos y diferente movilidad para los líquidos, conforme a los objetivos particulares de separación.

II. Experimental

Parámetros:

- UV( lámpara con longitud de onda de 270nm ).

- Columna C-18.

- Flujo total de la fase móvil 1ml/min.

- Volumen del inyector 50µl.

- Fase móvil: Buffer fosfato potásico monobásico 25mM

(pH=4); Acetonitrilo.

- Duración de la corrida 18min.

- Presión máxima 300kgf/cm² ; presión mínima 10kgf/cm² .

Procedimientos de calibración

Para la calibración del método se hicieron correr en el equipo tres muestras del estándar puro (nitroxinil) disuelto en metanol, en concentraciones conocidas.

Del software del equipo se obtuvo la siguiente tabla, donde se muestran los patrones de calibrado con sus correspondientes concentraciones, áreas de picos y tiempos de retención.

Concentración (μg/ml)	Área del pico	Tiempo de retención (min)
0.5	166086	12.835
1	425030	12.834
2.5	895203	13.601

Tabla 1

Seguidamente se procedió al armado de una recta de calibración de las concentraciones en función del área de los picos para obtener una regresión que establezca una ecuación lineal que posibilite la obtención de concentraciones desconocidas de diferentes muestras (gráfico 1).

Gráfico 1: Calibración

Parametro Valor

A 25087.8

B 352763.9

R 0.99336

Área = A + B * C(µg/ml) à C(µg/ml) = (Área-A) / B

Siendo el área dada por la muestra de 292166, tenemos que la concentración es de:

C(µg/ml) = (292166-(25087,8)) / (352763,9) = 0.76µg/ml

III. Análisis de resultados

Como se puede observar en los parámetros de calibrado anteriormente calculados, la recta se ajusta de manera medianamente correcta ya que el coeficiente de correlación tuvo un valor de 0.99336. Mediante la recta obtenida en la calibración se procedió al cálculo de la concentración de la muestra problema conociendo el valor del área otorgado por el software anteriormente mencionado. Este valor fue de aproximadamente 0.76 µg/ml.

IV. Conclusión

Finalmente se pudo obtener el valor de la concentración del analito analizado en la muestra problema mediante el método de cromatografía líquida sin inconvenientes.